《彩虹小马:小马国女孩》的故事承接TV版第三季结局,紫悦(Twilight Sparkle)进化为天角兽(Alicorn),并加冕成为新公主。就在她开始适应公主生活之际,水晶帝国珍贵的王冠遭到偷窃。为了追回王冠,紫悦公主肩负起重要使命,独自踏入另一个平行世界。抵达那里后,她惊讶地发现穗龙(Spike)变成了一只狗,而自己也变成了拥有双手、能够用双腿站立的人类少女。身份转变为高中生的紫悦,还将在这个陌生世界中再次遇见化身为人类的朋友们。
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